После трагической гибели родителей, Питер Паркер живет с дядей Беном и тетей Мэй, пытаясь справиться с повседневными проблемами обычного подростка. Однажды, обнаружив странные документы своего отца, Питер решает проникнуть в компанию Oscorp, где его отец когда-то работал с доктором Куртом Коннорсом над проектом по межвидовой генетике. Во время тайного посещения лаборатории юношу кусает генетически модифицированный паук, после чего у него начинают проявляться удивительные способности: сверхсила, молниеносная реакция, невероятная ловкость и особое "паучье чутьё", предупреждающее его об опасности.

Питер не сразу понимает, как правильно распорядиться этими дарами и что великая сила влечет за собой великую ответственность. Пережив личную трагедию и осознав свое предназначение, он становится Человеком-пауком – защитником Нью-Йорка, сражающимся со злом. Параллельно с этим Питер пытается разобраться в тайне исчезновения своих родителей, развивает отношения с умной и привлекательной одноклассницей Гвен Стейси, и противостоит могущественному злодею, чьи эксперименты угрожают превратить жителей города в жутких мутантов.